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| 3. |  | SOUZA, J. R. T. de; IBELLI, A. M. G.; NOGUEIRA, A. R. de A.; REGITANO, L. C. de A. Avaliação de métodos alternativos para transporte e para armazenamento de tecidos e de amostras de RNA. In: SIMPÓSIO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA EMBRAPA PECUÁRIA SUDESTE, 2., 2007, São Carlos, SP. Anais... São Carlos: Embrapa Pecuária Sudeste, 2007. (Embrapa Pecuária Sudeste. Documentos, 76).| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 6. | | IBELLI, A. M. G.; RIBEIRO, A. R. B.; SOUZA, J. R. T. de; ALENCAR, M. M. de; REGITANO, L. C. de A. Escolha e padronização de um protocolo de hemólise de amostras para extração de RNA. In: JORNADA CIENTÍFICA-EMBRAPA SÃO CARLOS, 2009, São Carlos, SP. Anais... São Carlos, SP: Embrapa Pecuária Sudeste: Embrapa Instrumentação Agropecuária, 2009. Editado por Luiz Francisco Zafalon, Simone Cristina Méo Niciura. p. 21| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 7. | | RIBEIRO, A. R. B.; ALENCAR, M. M. de; IBELLI, A. M. G.; CARVALHO, F. M.; SOUZA, J. R. T.; REGITANO, L. C. de A. Expressão de genes das proteínas de choque térmico em bovinos Nelore, Senepol x Nelore e Angus x Nelore após estresse térmico. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 55., 2009, Águas de Lindóia. Anais... Águas de Lindóia: SBG, 2009. p. 210.| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 9. | | IBELLI, A. M. G.; SOUZA, J. R. T.; GASPARIN, G.; OLIVEIRA, M. C. de S.; ALENCAR, M. M. de; COUTINHO, L. L.; VENERONI, G. B.; TIZIOTO, P. C.; REGITANO, L. C. de A. Expressão gênica de bovinos Nelore e cruzados Canchim X Nelore, Simental X Nelore e Angus X Nelore infestados com carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 55., 2009, Águas de Lindóia, SP. Resumos... Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 2009. p. 210. p. 210| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 10. | | IBELLI, A. M. G.; ANDRÉO, R.; COUTINHO, L. L.; GOUVEIA, J. J. S.; NAKATA, L. C.; OLIVEIRA, M. C. de S.; SOUZA, J. R. T.; ZAROS, L. G.; REGITANO, L. C. de A. Seleção de genes constitutivos para estudos de expressão gênica em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 53., 2007, Águas de Lindóia, SP. Anais... Águas de Lindóia: SBG, 2007. p. 151| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| 11. | | RIBEIRO, A. R. B.; ALENCAR, M. M. de; REGITANO, L. C. de A.; OLIVEIRA, M. C. de S.; IBELLI, A. M. G.; SOUZA, J. R. T. de; PAÇÓ, A. L.; RAMOS, A. C. L.; MIYAJIMA, M. M.; CALABRIA, P.; CHIMENEZ, V. Respostas fisiológicas de bovinos Nelore, Senepol x Nelore e Angus x Nelore submetidos a teste de tolerância ao calor. In: SIMPÓSIO BRASILEIRO DE MELHORAMENTO ANIMAL, 7., 2008, São Carlos, SP. Anais... São Carlos, SBMA, 2008.| Biblioteca(s): Embrapa Pecuária Sudeste. |
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| Registros recuperados : 11 | |
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Registro Completo
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Biblioteca(s): |
Embrapa Pecuária Sudeste. |
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Data corrente: |
18/10/2007 |
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Data da última atualização: |
10/08/2011 |
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Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
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Autoria: |
IBELLI, A. M. G.; ANDRÉO, R.; COUTINHO, L. L.; GOUVEIA, J. J. S.; NAKATA, L. C.; OLIVEIRA, M. C. de S.; SOUZA, J. R. T.; ZAROS, L. G.; REGITANO, L. C. de A. |
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Afiliação: |
ADRIANA MÉRCIA G. IBELLI, UFSCar/SÃO CARLOS, SP.; R. Andréo, ESALQ/USP/PIRACICABA,SP.; LUIZ L. COUTINHO, ESALQ/USP/PIRACICABA,SP.; J. J. S. Gouveia, UFSCar/SÃO CARLOS, SP.; L. C. Nakata, ESALQ/USP/PIRACICABA, SP.; MARCIA CRISTINA DE SENA OLIVEIRA, CPPSE; J. R. T. Souza, UNICEP/SÃO CARLOS, SP.; L. G. Zaros, CENTEC; LUCIANA CORREIA DE ALMEIDA REGITANO, CPPSE. |
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Título: |
Seleção de genes constitutivos para estudos de expressão gênica em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos |
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Ano de publicação: |
2007 |
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Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 53., 2007, Águas de Lindóia, SP. Anais... Águas de Lindóia: SBG, 2007. |
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Páginas: |
p. 151 |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
A quantificação de RNA mensageiro é amplamente utilizada em estudos de expressão gênica. O método de reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) em tempo real é um dos mais sensíveis e eficientes para examinar os padrões de expressão. Para que se tenha uma análise confiável, a escolha de genes constitutivos estáveis é essencial. Estes genes devem apresentar expressão constante, independentemente do tecido ou tratamento utilizado. Isto permite a normalização de diferenças existentes na quantidade inicial de RNA, em possíveis variações experimentais e na síntese de cDNA. Diversos genes como GAPDH, RNA ribossômico 18S e actinas são empregados, porém variações já foram observadas, sugerindo que nenhum gene possa ser considerado estável para todas as condições experimentais. O objetivo deste trabalho foi selecionar um gene constitutivo estável em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos. Dez bezerros da raça Nelore foram mantidos livres de infecções por parasitos desde o nascimento. Esses animais foram separados em dois grupos: 5 animais submetidos a infecção artificial com larvas de Haemonchus spp (grupo tratamento) e 5 animais livres de infecção (grupo controle). A coleta de amostras de tecidos e linfonodos abomasais foi feita sete dias após a infecção. O isolamento do RNA total foi feito com reagente Trizol (Invitrogen) e síntese de cDNA por transcrição reversa. A quantificação dos genes RPL-19, GAPDH e HPRT-1 foi avaliada pela técnica de RT-PCR em tempo real utilizando SYBR Green como corante. As análises referentes às quantificações foram realizadas com os valores de Ct obtidos para cada gene. A fim de verificar possíveis variações entre os genes, foram utilizados os programas Analyse-it (Excel), o teste não paramétrico Randomisation test e o programa de normalização Genorm. Os resultados mostraram que para linfonodo abomasal os genes RPL-19 e GAPDH não apresentaram expressão diferencial entre os tratamentos (p>0,05), enquanto que HPRT-1 foi diferencialmente expresso (p<0,05) no teste não paramétrico Randomisation test. Entre os genes RPL-19 e GAPDH os valores de desvio e erro padrão foram 1,23, 0,39 e 2,24 e 0,71, respectivamente. Para abomaso, não houve diferença significativa entre os grupos experimentais para nenhum dos três genes analisados e o gene RPL-19 apresentou o menor desvio e erro padrão (2,34 e 0,74, respectivamente). A análise realizada pelo programa Genorm mostrou que para ambos os tecidos, o gene RPL-19 foi o mais estável entre os três. Desta maneira, o gene RPL-19 foi o que mostrou maior estabilidade entre os genes analisados, podendo ser empregado em estudos de expressão gênica com tecidos e linfonodos abomasais de bovinos. MenosA quantificação de RNA mensageiro é amplamente utilizada em estudos de expressão gênica. O método de reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) em tempo real é um dos mais sensíveis e eficientes para examinar os padrões de expressão. Para que se tenha uma análise confiável, a escolha de genes constitutivos estáveis é essencial. Estes genes devem apresentar expressão constante, independentemente do tecido ou tratamento utilizado. Isto permite a normalização de diferenças existentes na quantidade inicial de RNA, em possíveis variações experimentais e na síntese de cDNA. Diversos genes como GAPDH, RNA ribossômico 18S e actinas são empregados, porém variações já foram observadas, sugerindo que nenhum gene possa ser considerado estável para todas as condições experimentais. O objetivo deste trabalho foi selecionar um gene constitutivo estável em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos. Dez bezerros da raça Nelore foram mantidos livres de infecções por parasitos desde o nascimento. Esses animais foram separados em dois grupos: 5 animais submetidos a infecção artificial com larvas de Haemonchus spp (grupo tratamento) e 5 animais livres de infecção (grupo controle). A coleta de amostras de tecidos e linfonodos abomasais foi feita sete dias após a infecção. O isolamento do RNA total foi feito com reagente Trizol (Invitrogen) e síntese de cDNA por transcrição reversa. A quantificação dos genes RPL-19, GAPDH e HPRT-1 foi avaliada pela técnica de RT-PCR em tempo real utilizando ... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Bovinos; Gene constitutivo; RPL-19; RT-PCR em tempo real. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/39628/1/PROCILCAR2007.00178.pdf
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Marc: |
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520 $aA quantificação de RNA mensageiro é amplamente utilizada em estudos de expressão gênica. O método de reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) em tempo real é um dos mais sensíveis e eficientes para examinar os padrões de expressão. Para que se tenha uma análise confiável, a escolha de genes constitutivos estáveis é essencial. Estes genes devem apresentar expressão constante, independentemente do tecido ou tratamento utilizado. Isto permite a normalização de diferenças existentes na quantidade inicial de RNA, em possíveis variações experimentais e na síntese de cDNA. Diversos genes como GAPDH, RNA ribossômico 18S e actinas são empregados, porém variações já foram observadas, sugerindo que nenhum gene possa ser considerado estável para todas as condições experimentais. O objetivo deste trabalho foi selecionar um gene constitutivo estável em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos. Dez bezerros da raça Nelore foram mantidos livres de infecções por parasitos desde o nascimento. Esses animais foram separados em dois grupos: 5 animais submetidos a infecção artificial com larvas de Haemonchus spp (grupo tratamento) e 5 animais livres de infecção (grupo controle). A coleta de amostras de tecidos e linfonodos abomasais foi feita sete dias após a infecção. O isolamento do RNA total foi feito com reagente Trizol (Invitrogen) e síntese de cDNA por transcrição reversa. A quantificação dos genes RPL-19, GAPDH e HPRT-1 foi avaliada pela técnica de RT-PCR em tempo real utilizando SYBR Green como corante. As análises referentes às quantificações foram realizadas com os valores de Ct obtidos para cada gene. A fim de verificar possíveis variações entre os genes, foram utilizados os programas Analyse-it (Excel), o teste não paramétrico Randomisation test e o programa de normalização Genorm. Os resultados mostraram que para linfonodo abomasal os genes RPL-19 e GAPDH não apresentaram expressão diferencial entre os tratamentos (p>0,05), enquanto que HPRT-1 foi diferencialmente expresso (p<0,05) no teste não paramétrico Randomisation test. Entre os genes RPL-19 e GAPDH os valores de desvio e erro padrão foram 1,23, 0,39 e 2,24 e 0,71, respectivamente. Para abomaso, não houve diferença significativa entre os grupos experimentais para nenhum dos três genes analisados e o gene RPL-19 apresentou o menor desvio e erro padrão (2,34 e 0,74, respectivamente). A análise realizada pelo programa Genorm mostrou que para ambos os tecidos, o gene RPL-19 foi o mais estável entre os três. Desta maneira, o gene RPL-19 foi o que mostrou maior estabilidade entre os genes analisados, podendo ser empregado em estudos de expressão gênica com tecidos e linfonodos abomasais de bovinos.
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Embrapa Pecuária Sudeste (CPPSE) |
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